thermo賽默飛NanoDrop Ultra FL紫外分光光度計低濃度樣品測量不準

NanoDrop Ultra FL在處理低濃度樣品時出現偏差，核心原因是紫外吸收法的物理限制導致的信噪比不足。當DNA濃度低于2ng/μL時，測得的信號已經非常弱，和儀器本身的背景噪音幾乎相當，任何微小的干擾都會被放大，導致結果不可靠。

一、具體數值可以參考下表：

1、dsDNA

測量模式：吸光度模式

檢測限 (LOD)：1 ng/μL

推薦用于精確定量(定量限)：> 5 ng/μL

建議行動：如果濃度 >5 ng/μL，可使用。若在1-5 ng/μL之間，結果僅供參考，變異度較大。

2、RNA

測量模式：吸光度模式

檢測限 (LOD)：約2 ng/μL

推薦用于精確定量(定量限)：> 10 ng/μL

建議行動：同上，建議濃度在檢測上限范圍內測量

3、dsDNA

測量模式：熒光模式

檢測限 (LOD)：0.1 ng/μL

推薦用于精確定量(定量限)：0.1 - 100 ng/μL

建議與行動：低濃度樣品的選擇。覆蓋了吸光模式力所不及的范圍，推薦使用此模式。

4、RNA

測量模式：熒光模式

檢測限 (LOD)：0.2 ng/μL

推薦用于精確定量(定量限)：<10 ng/μL

建議與行動：對超低濃度RNA樣品進行高靈敏度檢測

二、除了原理的限制，操作不當也是造成結果不準的重要原因：

1、樣品問題：測量前充分混勻，特別是粘稠的基因組DNA，輕微的渦旋震蕩并短暫離心（如12,000rpm，2分鐘）即可。檢查樣品有無雜質或氣泡，如有，可離心或過濾處理。

2、操作細節：確保點樣量為1.5-2μL，能夠形成完整的液柱。測量時，請確保樣品覆蓋下基座檢測點，并立即放下檢測臂，防止樣品蒸發。

3、溶劑匹配：空白對照必須和樣品溶解液一致。例如，樣品用TE Buffer溶解，空白也需用相同的TE Buffer。

4、儀器狀態：保持上下基座光潔，并定期使用PV-1試劑盒執行性能驗證。同時，確保儀器環境穩定，無強光、無振動。

三、總結與核心建議

1、對于要求精準定量的低濃度樣品（如<2 ng/μL），最佳實踐是使用NanoDrop Ultra FL的熒光模式，其0.1 ng/μL的靈敏度遠超吸光度模式。

2、降低背景噪音：使用與樣品一致的空白緩沖液進行校正，減少背景干擾。

3、從源頭提升信噪比：如果樣品本身是從低豐度樣本中提取的，建議優化提取或純化流程，從源頭上提升樣品濃度。