小小抗體用處大系列1：IHC抗體DSP空間組學的黃金領航員

閱讀：102 發布時間：2026-5-11

GeoMx Digital Spatial Profiler（DSP）是NanoString公司于2019年推出的空間多組學平臺，這是一種革命性的技術，結合了組織影像分析和原位定量技術，允許研究人員在完整組織切片上實現高通量組織空間原位轉錄組和蛋白組的檢測，在獲得高分辨率的樣本空間信息的同時，實現高靶標蛋白和全轉錄組空間原位表達譜的精準獲取。IHC抗體是實現DSP空間定向分析的關鍵工具之一，DSP技術需要將蛋白質精確地錨定在組織的原位，理解細胞在特定微環境中的行為和功能。IHC應用的抗體，在DSP空間蛋白組中就是直接的"探測器"和"識別器"，用于檢測和量化特定蛋白質的空間表達。

DSP空間空間組學原理

DSP空間蛋白組學平臺以探針作為基因檢測和定量手段。探針由三部分組成：靶蛋白結合的抗體；紫外光可切割linker；用于標記核苷酸序列即DSP barcode

可以通過GeoMx DSP Protein Barcoding Kit對IHC抗體進行DSP barcode 標記

圖 1 DSP barcode 示意圖

DSP實驗流程：

第一步：采用IHC方法，將帶熒光標記的探針、定量試劑（標記DSP條形碼的抗體）對組織切片進行染色
第二步：通過全片掃描確定ROI，或在此基礎上，再根據形態學marker進行進一步圈選目標區域（Area of Illumination，AOI）；
第三步：通過紫外光照射切割ROI或AOI 中的Linker，再收集DSP barcode
第四步：將寡核苷酸加入96孔板中（每一個孔對應組織切片上選擇的一個ROI/AOI）；
第五步：對收集的寡核苷酸標簽序列進行PCR擴增建庫，加上測序接頭，在高通量測序平臺進行測序，然后再進行下游分析

圖 2 實驗流程示意圖

支持IHC應用的抗體，在DSP空間蛋白組中扮演著"領航員"的角色。它們是DSP空間蛋白組技術能夠識別、定位和量化目標蛋白質的基石。優質IHC 抗體庫為DSP空間蛋白組提供了"工具箱"

- 如果是作為預實驗工具：它們幫助研究者確定需要進行DSP空間蛋白組分析的精確空間區域 (ROI)。
- 如果是直接作為DSP探針：它們本身就是DSP空間蛋白組技術的核心，直接用于在選定區域內檢測和量化特定蛋白質。

支持DSP的抗體也需要以下滿足這些要求

- 核心要求一：高特異性
在IHC/IF中表現優異的抗體，是DSP應用的優秀候選者。
斯達特專有兔單抗重組技術，利用兔子更豐富的免疫譜提供大量高特異性的抗體

- 核心要求二：無交叉反應性
抗體必須只與其靶蛋白結合，而不能與其他蛋白或面板中的其他抗體發生交叉反應。
斯達特抗體在多種屬多種組織樣本中進行嚴格驗證，確保抗體五交叉反應

- 核心要求三：親和力與靈敏度
抗體需要有足夠高的親和力，能夠在復雜的樣本中福爾馬林固定石蠟包埋組織樣本中有效結合靶蛋白。（例如FFPE樣本，因此抗體必須能夠識別經過福爾馬林交聯和抗原修復處理后的表位）同時還需滿足低背景下的高信號，能夠在低表達水平的目標上產生可檢測的信號，同時保持極低的背景。
斯達特重點專注于重組兔單抗，兔單抗的平衡解離常數 (KD) 值通常在皮摩爾級別，而鼠抗大部分在納摩爾級別，兔單抗顯出更高的靈敏度

- 核心要求四：無聚集傾向
抗體必須在標記了寡核苷酸標簽后，以及在實驗過程中保持穩定，不能發生聚集。

- 核心要求五：兼容寡核苷酸標記
這是DSP技術的要求。抗體需要能夠與一個或多個寡核苷酸序列共價連接，而不影響其結合能力。標記后活性保留：標記過程（通常是通過與抗體上的賴氨酸或半胱氨酸殘基連接）不能破壞抗體的抗原結合位點。

斯達特可提供不含carrier protein高濃度的抗體，支持寡核苷酸的偶聯

- 核心要求六：批次間一致性
不同批次的抗體在標記后必須保持一致的性能。
斯達特重組兔單抗，保留抗體質粒，可以更加穩定的保存，支持高批間一致性