FRα伴隨診斷抗體如何指導(dǎo)ADC治療精準(zhǔn)用藥？

FRα由FOLR1編碼，是分子量38-40 kDa的細(xì)胞表面糖蛋白，最初作為葉酸結(jié)合蛋白被發(fā)現(xiàn)，1991年被克隆為腫瘤相關(guān)抗原。FRα對(duì)還原葉酸及葉酸有很高親和力，通過(guò)胞吞作用吸收葉酸，在胚胎發(fā)育中至關(guān)重要。FRα在正常細(xì)胞中幾乎不表達(dá)，在實(shí)體瘤中有廣泛高表達(dá)：間皮瘤72-100%，卵巢癌76-89%，三陰性乳腺癌35-68%，非小細(xì)胞肺癌14-74%。非惡性組織中僅肺部頂端支氣管上皮細(xì)胞有一定比例表達(dá)。FRα除運(yùn)送葉酸外，也是腫瘤細(xì)胞的"幫兇"。FRα轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中充當(dāng)轉(zhuǎn)錄因子，與順式調(diào)節(jié)元件結(jié)合，直接調(diào)節(jié)癌細(xì)胞關(guān)鍵發(fā)育基因的表達(dá)。在癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移過(guò)程中，F(xiàn)Rα起推波助瀾作用。FRα在腫瘤中的限制性表達(dá)及生物學(xué)功能，使其成為具潛力的治療靶點(diǎn)。FRα伴隨診斷抗體通過(guò)免疫組化檢測(cè)腫瘤組織中FRα的表達(dá)水平，篩選靶向治療優(yōu)勢(shì)人群。

FRα與葉酸結(jié)合后，啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)信號(hào)網(wǎng)絡(luò)，調(diào)節(jié)非受體酪氨酸激酶PEAK1的磷酸化，促進(jìn)ERK及STAT3的激活，二者都是調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育及分裂的關(guān)鍵信號(hào)。葉酸受體通過(guò)下調(diào)細(xì)胞間粘附分子E-鈣粘蛋白，使癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移。腫瘤轉(zhuǎn)移需要減少細(xì)胞黏附和增加運(yùn)動(dòng)能力，E-鈣粘蛋白越少，腫瘤移動(dòng)能力隨之增強(qiáng)。理論上通過(guò)抑制FRα可以控制腫瘤轉(zhuǎn)移及侵襲。FRα參與腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及進(jìn)展，并在惡性腫瘤中特異性表達(dá)，使之成為腫瘤治療具開(kāi)發(fā)潛力的新靶點(diǎn)。FRα伴隨診斷抗體用于檢測(cè)FRα表達(dá)水平，評(píng)估患者從靶向治療中的獲益可能性。

由于FRα在惡性腫瘤中特異性表達(dá)，小分子藥物偶聯(lián)物、單克隆抗體、雙特異性抗體、CAR-T、抗體偶聯(lián)藥物及葉酸-細(xì)胞毒性藥物偶聯(lián)物等不同領(lǐng)域均有開(kāi)發(fā)。小分子藥物偶聯(lián)物與葉酸偶聯(lián)，用于FRα靶向。靶向FRα的疫苗用FRα mRNA改造的自體樹突細(xì)胞通過(guò)T細(xì)胞介導(dǎo)，實(shí)現(xiàn)抗FRα免疫反應(yīng)。CAR-T細(xì)胞識(shí)別FRα觸發(fā)腫瘤細(xì)胞殺傷。單克隆抗體對(duì)FRα特異性識(shí)別，直接抑制導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡。抗體通過(guò)將表達(dá)FRα的腫瘤細(xì)胞與攜帶Fc受體的免疫效應(yīng)細(xì)胞聯(lián)系起來(lái)，通過(guò)產(chǎn)生ADCC及ADCP增強(qiáng)效應(yīng)細(xì)胞活化和靶向中和功能。補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性激活也是作用機(jī)制之一。

ADC由靶向特異性抗原的單克隆抗體與小分子細(xì)胞毒性藥物通過(guò)連接子鏈接而成，兼具傳統(tǒng)小分子化療的殺傷效應(yīng)及抗體藥物的腫瘤靶向性。FRα在單抗和小分子藥領(lǐng)域相繼失利后，卻在ADC賽道殺出一條血路。ADC對(duì)抗原的識(shí)別導(dǎo)致ADC通過(guò)內(nèi)吞途徑進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，通過(guò)溶酶體降解后，有效載荷以生物活性形式釋放并發(fā)揮作用，導(dǎo)致癌細(xì)胞死亡。FRα高表達(dá)患者是ADC治療的優(yōu)勢(shì)人群。FRα伴隨診斷抗體通過(guò)免疫組化篩選FRα高表達(dá)患者，指導(dǎo)ADC臨床使用，提高治療有效率，避免無(wú)效治療及毒性暴露。

FRα免疫組化檢測(cè)已獲批作為伴隨診斷，用于篩選適合接受FRα靶向ADC治療的患者。判讀標(biāo)準(zhǔn)為≥75%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)中至強(qiáng)強(qiáng)度的膜染色定義為FRα高表達(dá)，適合接受靶向治療。判讀需評(píng)估膜染色的完整性及強(qiáng)度，陽(yáng)性細(xì)胞需呈現(xiàn)清晰的膜染色，胞質(zhì)及核染色不計(jì)入。染色強(qiáng)度分為無(wú)染色、弱染色、中度染色及強(qiáng)染色四級(jí)。陽(yáng)性細(xì)胞比例需計(jì)數(shù)至少100個(gè)腫瘤細(xì)胞中的膜陽(yáng)性細(xì)胞百分比。判讀標(biāo)準(zhǔn)化要求不同實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果可比，需定期進(jìn)行質(zhì)控及熟練度測(cè)試。

FRα伴隨診斷抗體用于免疫組化需優(yōu)化抗原修復(fù)條件，推薦使用EDTA緩沖液高壓修復(fù)。陽(yáng)性對(duì)照設(shè)置很重要，已知FRα高表達(dá)的卵巢癌組織應(yīng)作為對(duì)照，確保染色體系有效。分析前變量包括組織固定時(shí)間、抗原修復(fù)條件及抗體孵育時(shí)間，均需嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)化。固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短均可影響抗原檢測(cè)，推薦固定時(shí)間6-72小時(shí)。判讀時(shí)需區(qū)分膜染色與胞質(zhì)背景，僅膜陽(yáng)性計(jì)入陽(yáng)性細(xì)胞。不同克隆號(hào)抗體可能產(chǎn)生差異，需選擇經(jīng)臨床驗(yàn)證的克隆。質(zhì)量控制需涵蓋特異性、靈敏度及批間一致性。

杭州斯達(dá)特生物科技有限公司自主研發(fā)的 FRα伴隨診斷抗體（Human folate receptor alpha Recombinant Rabbit mAb (SDT-719-684)）（貨號(hào)：S0B2388），是一款具有高特異性、高靈敏度及優(yōu)異批間穩(wěn)定性的重組單克隆抗體產(chǎn)品。該抗體采用重組表達(dá)技術(shù)制備，針對(duì)人葉酸受體α（FRα，F(xiàn)OLR1）蛋白特異性開(kāi)發(fā)，在腫瘤靶向治療伴隨診斷、腫瘤免疫組化檢測(cè)及抗體藥物篩選等領(lǐng)域具有重要應(yīng)用價(jià)值。